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化工儀器網>產品展廳>試劑標物>行業專用試劑>生物試劑>cAMP 環磷酸腺苷(cAMP) ELISA 試劑盒

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cAMP 環磷酸腺苷(cAMP) ELISA 試劑盒

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我們相信,將互聯網的力量與開放公平的貿易環境相結合,能夠創造更多的經濟機會和在緩解世界貧窮方面起到主要作用。通過為顧客提供節約成本的產品及服務平臺,我們公司在為發展中國家和發展國家創造工作和經濟機會方面起到重要作用。


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環磷酸腺苷(cAMP) ELISA 試劑盒

工作原理

本試劑盒采用雙位點夾心酶聯免疫吸附法(ELISA),測定樣品中的水平。向預先包被抗體的酶標孔中加入標準品、待測樣本和HRP標記的抗體,經過溫育和洗滌,去除未結合的組分,然后再加入底物A、B,產生藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中的濃度呈正相關。

環磷酸腺苷(cAMP) ELISA 試劑盒

1

標準品(100pg/ml

0.5ml

7

顯色劑A

6ml

2

標準品稀釋液

6mL

8

顯色劑B

6ml

3

酶標包被板

12×8

9

終止液

6ml

4

酶標試劑

6ml

10

說明書

1

5

20×濃縮洗滌液

25ml

11

封板膜

2

6

樣品稀釋液

6ml

12

密封袋

1

注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:100、50、25、12.5、6.25、0 pg/ml

需要而未提供的試劑和器材

1.   37℃恒溫箱。

2.   標準規格酶標儀。

3.   精密移液器及一次性吸頭

4.   蒸餾水,

5.   一次性試管

6.   吸水紙

注意事項

1.   2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.   各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差

3.   建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。

4.   嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

5.   為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。

6.   不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

7.   底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。

自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中

 

標本要求

1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

操作程序

1.   分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入標準品50μl;在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動混勻,37℃溫育60分鐘。

2.   棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復5次,拍干。

3.   每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

4.   取出酶標板,每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

5.   測定:以空白孔調零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

6.   根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應該乘以總稀釋倍數。



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