產(chǎn)品名稱： 小鼠巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-5(MIP-5)ELISA試劑盒

規(guī)格：48T/96T
服務(wù)：免費(fèi)代測(cè)，免費(fèi)索取產(chǎn)品說(shuō)明書、免費(fèi)技術(shù)指導(dǎo)等。
檢測(cè)種屬：人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測(cè)試劑盒等種屬。
ELISA常用的方法：雙抗體夾心法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法以及BAS-ELISA等。
存放環(huán)境：2-8℃，避光防潮保存。
檢測(cè)種屬：人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測(cè)試劑盒等種屬。
適用范圍：此試劑盒僅用于科研實(shí)驗(yàn)，禁用于臨床。

概述：
ELISA（酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析）是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。目前我們對(duì)客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。

小鼠巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-5(MIP-5)ELISA試劑盒標(biāo)本要求 
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。 
操作步驟 
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可向客服索取說(shuō)明書》》 在線索取 
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中 先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。 
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。 
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。 
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 
7.溫育：操作同3。 
8.洗滌：操作同5。 
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。 
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

小鼠巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-5(MIP-5)ELISA試劑盒技術(shù)流程:
一、雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原)
1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。
二、間接法(檢測(cè)未知抗體)
1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃。次日洗滌3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)
3、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。