大鼠凋亡相關(guān)因子(BCL-2)ELISA試劑盒說明書

用途：定量檢測(cè)細(xì)胞液、體液、組織、血清、血漿等標(biāo)本中 大鼠凋亡相關(guān)因子(BCL-2)ELISA試劑盒說明書含量

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操作方法：

一、雙抗體夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）。

2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔）。

3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。

二、間接法

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；

4.（同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；

6.zui后一遍用DDW洗滌。

其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

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標(biāo)本收集: 血清：全血標(biāo)本于室溫放置2小時(shí)或4℃后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。血漿：抗凝劑*使用EDTA，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)。避免使用溶血，高血脂標(biāo)本。其它生物標(biāo)本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)標(biāo)本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。標(biāo)本收集后若不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃/-80℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融，6個(gè)月內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),4℃保存的應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。 如果樣本中檢測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui高值，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù))。
酶標(biāo)儀(450nm波長(zhǎng)濾光片)高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL,200-1000μL37℃恒溫箱, 雙蒸水或去離子水。

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